La Pinacoteca Nazionale di Siena se trouve dans le centre historique de la ville. La Pinacoteca abrite la plus importante collection de peintures sur bois doré des XIVe et XVe siècles siennois. Le premier noyau de la collection est né à la fin du XVIIIe siècle grâce à la passion des érudits locaux qui ont voulu sauver des destructions et des aliénations les œuvres d'art de l'époque la plus ancienne, des soi-disant primitifs. Le musée a été inauguré dans les Palazzi Buonsignori et Brigidi en 1932 avec l'organisation scientifique de Cesare Brandi qui, en 1933, a publié le catalogue. L'histoire la plus récente de la Pinacoteca a vu, depuis la fin des années 1970, un processus de renouvellement de l'exposition, né de la vague des nombreuses expositions thématiques dédiées aux courants artistiques les plus significatifs représentés dans la collection. La visite du musée commence au deuxième étage où sont exposées les peintures de l'âge d'or de la peinture gothique siennoise, des origines jusqu'au XVe siècle en passant par les chefs-d'œuvre de Duccio, Simone Martini, des frères Pietro et Ambrogio Lorenzetti et des artistes de la fin du XIVe siècle. Au XVe siècle, la peinture raffinée et imaginative de Giovanni di Paolo et Sano di Pietro est confirmée, mais aussi les ouvertures au renouveau de la Renaissance de Sassetta, Vecchietta, Matteo di Giovanni, jusqu'à l'adhésion pleine et entière à la culture classique de Francesco di Giorgio Martini. Au premier étage, l'évolution artistique vers le maniérisme est attestée grâce à la contribution de Domenico Beccafumi, largement représenté aux côtés de ses contemporains Sodoma, Riccio, Marco Pino, Brescianino. Une aile est dédiée aux peintres qui, depuis la fin du XVIe siècle, ont d'abord opéré dans un sens maniériste tardif puis dans un sens naturaliste, impressionnés par la nouveauté de Caravage : Francesco Vanni, Rutilio Manetti et Bernardino Mei. Toujours au deuxième étage, l'aménagement récent du salon des sculptures lapidaires offre au visiteur un panorama suggestif sur les toits de Sienne.